透析型胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
基因組DNA提取
服務項目
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材料要求
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服務價格
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獲得DNA量
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周期
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**基因組DNA提取
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對數(shù)生長期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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1-2ug
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1-2周
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細胞基因組DNA提取
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1×106新鮮或凍存的細胞
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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血液基因組DNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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組織基因組DNA提取
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100mg新鮮或-20度凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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服務項目
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材料要求
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服務價格
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獲得RNA量
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周期
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**總RNA提取
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對數(shù)生長期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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細胞總RNA提取
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1×106懸浮培養(yǎng)或新鮮收集的細胞
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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血液總RNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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動物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈100ug
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1-2周
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植物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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透析型胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
酵母雙(單)雜交cDNA文庫構建
1. 服務流程
1.1 客戶樣品QC
1.2 Total RNA的提取。
1.3 mRNA的分離。
1.4 以mRNA為模板進行cDNA雙鏈的合成。
1.5 對合成的cDNA雙鏈進行分級純化。
1.6 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進行重組反應。
1.7 將重組產(chǎn)物轉化DH10B感受態(tài)細胞。
1.8 cDNA文庫的QC。
a) 檢測文庫庫容量。
b)隨機挑取32個克隆子,PCR檢測平均插入片段大小,陽性率。
1.9 初級文庫鋪板,抽提質粒
1.10 初級文庫質粒與PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定
載體,根據(jù)客戶需求確定載體)載體進行重組反應,電轉化,檢測文庫質量。
a) 檢測文庫庫容量。
b)每個文庫隨機挑取32個克隆子,PCR檢測平均插入片段大小,陽性率。
2.送樣要求
2.1 針對每個文庫,客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本,或者至少500ug總RNA。
3.發(fā)貨內容
3.1 我們提供構建好的酵母文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養(yǎng)基),擴增后初級文庫甘油菌,初級
文庫中抽質粒,隨機克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫構建報告,酵母雙雜交篩選相關細胞和質粒。
4.質量標準
4.1 文庫庫容量:大于1*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
4.3 陽性率:大于95%。
5.服務時間
30個工作日內
收費:人民幣30000.00
透析型胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
基因甲基化檢測
甲基化是在DNA甲基轉移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶環(huán)的五號碳原子上加上甲基的共價修飾過程。DNA甲基化修飾現(xiàn)象廣泛存在于多種有機體中,是*早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一,是表觀遺傳學(Epigenetics)的重要組成部分。大量研究表明,DNA甲基化不改變DNA的**結構,但是能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而在基因的表達及其調控、DNA的復制、細胞的生長發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類** (如發(fā)育畸形、癌癥、心血管**、糖尿病和神經(jīng)心理失調等)發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。 DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N6-甲基腺嘌呤及7-甲基鳥嘌呤。在高等生物中,5-甲基胞嘧啶多發(fā)于CpG二核苷酸序列中,基因組中60%-90%的CpG是甲基化的。在甲基轉移酶(DNMT)的催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供的甲基,使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧啶極易在進化中丟失,高等真核生物中CpG序列遠遠低于其理論值,但在基因組的某些區(qū)域中,通常是基因的啟動子和**外顯子區(qū),CpG序列密度很高,可以達均值的5倍以上,成為鳥嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū),形成所謂的CpG島。哺乳類基因組中約存在4萬個CpG島,大多位于轉錄單元的5’區(qū)。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現(xiàn)象,而啟動子CpG 島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。因此,基因啟動子甲基化檢測在臨床診斷、**敏感性檢測等方面具有很高的應用價值。
服務項目:
1.甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。
透析型胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
特點:適用范圍廣,能夠檢測特異位點是否發(fā)生甲基化。
2.亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶,*后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化,稱為BSP-直接測序法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。
特點:**度高,能夠準確檢測出甲基化的程度百分比。
送樣要求:
細胞(≥106 個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。
服務價格:
服務內容
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數(shù)量
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單價
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交貨期限
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數(shù)量
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亞硫酸氫鹽修飾后測序法(BSP)
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≤40個
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800元/樣本/基因(5個克隆)
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15~20個工作日
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>40個
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協(xié)商
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1000元/樣本/基因(10個克?。?/span>
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20~25個工作日
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>40個
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協(xié)商
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甲基化特異性的PCR法(MSP)
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≤50個
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350元/樣本/基因
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10~20個工作日
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>50個
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透析型胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
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