優(yōu)級(jí)胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
基因組DNA提取
服務(wù)項(xiàng)目
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材料要求
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服務(wù)價(jià)格
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獲得DNA量
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周期
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**基因組DNA提取
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對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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1-2ug
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1-2周
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細(xì)胞基因組DNA提取
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1×106新鮮或凍存的細(xì)胞
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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血液基因組DNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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組織基因組DNA提取
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100mg新鮮或-20度凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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服務(wù)項(xiàng)目
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材料要求
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服務(wù)價(jià)格
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獲得RNA量
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周期
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**總RNA提取
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對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的新鮮菌液1-2ml
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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細(xì)胞總RNA提取
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1×106懸浮培養(yǎng)或新鮮收集的細(xì)胞
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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血液總RNA提取
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1ml新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈1ug
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1-2周
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動(dòng)物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈100ug
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1-2周
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植物組織總RNA提取
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100mg新鮮或液氮凍存的樣本
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50元/樣品
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≈10ug
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1-2周
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優(yōu)級(jí)胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
酵母雙(單)雜交cDNA文庫(kù)構(gòu)建
1. 服務(wù)流程
1.1 客戶樣品QC
1.2 Total RNA的提取。
1.3 mRNA的分離。
1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。
1.5 對(duì)合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級(jí)純化。
1.6 將分級(jí)純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。
1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。
1.8 cDNA文庫(kù)的QC。
a) 檢測(cè)文庫(kù)庫(kù)容量。
b)隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子,PCR檢測(cè)平均插入片段大小,陽(yáng)性率。
1.9 初級(jí)文庫(kù)鋪板,抽提質(zhì)粒
1.10 初級(jí)文庫(kù)質(zhì)粒與PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定
載體,根據(jù)客戶需求確定載體)載體進(jìn)行重組反應(yīng),電轉(zhuǎn)化,檢測(cè)文庫(kù)質(zhì)量。
a) 檢測(cè)文庫(kù)庫(kù)容量。
b)每個(gè)文庫(kù)隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子,PCR檢測(cè)平均插入片段大小,陽(yáng)性率。
2.送樣要求
2.1 針對(duì)每個(gè)文庫(kù),客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本,或者至少500ug總RNA。
3.發(fā)貨內(nèi)容
3.1 我們提供構(gòu)建好的酵母文庫(kù)的甘油菌液(含20%甘油的LB培養(yǎng)基),擴(kuò)增后初級(jí)文庫(kù)甘油菌,初級(jí)
文庫(kù)中抽質(zhì)粒,隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫(kù)構(gòu)建報(bào)告,酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。
4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
4.1 文庫(kù)庫(kù)容量:大于1*10^7 CFU。
4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
4.3 陽(yáng)性率:大于95%。
5.服務(wù)時(shí)間
30個(gè)工作日內(nèi)
收費(fèi):人民幣30000.00
優(yōu)級(jí)胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
基因甲基化檢測(cè)
甲基化是在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶環(huán)的五號(hào)碳原子上加上甲基的共價(jià)修飾過(guò)程。DNA甲基化修飾現(xiàn)象廣泛存在于多種有機(jī)體中,是*早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一,是表觀遺傳學(xué)(Epigenetics)的重要組成部分。大量研究表明,DNA甲基化不改變DNA的**結(jié)構(gòu),但是能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而在基因的表達(dá)及其調(diào)控、DNA的復(fù)制、細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類** (如發(fā)育畸形、癌癥、心血管**、糖尿病和神經(jīng)心理失調(diào)等)發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N6-甲基腺嘌呤及7-甲基鳥(niǎo)嘌呤。在高等生物中,5-甲基胞嘧啶多發(fā)于CpG二核苷酸序列中,基因組中60%-90%的CpG是甲基化的。在甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供的甲基,使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧啶極易在進(jìn)化中丟失,高等真核生物中CpG序列遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其理論值,但在基因組的某些區(qū)域中,通常是基因的啟動(dòng)子和**外顯子區(qū),CpG序列密度很高,可以達(dá)均值的5倍以上,成為鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū),形成所謂的CpG島。哺乳類基因組中約存在4萬(wàn)個(gè)CpG島,大多位于轉(zhuǎn)錄單元的5’區(qū)。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現(xiàn)象,而啟動(dòng)子CpG 島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機(jī)制。因此,基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)在臨床診斷、**敏感性檢測(cè)等方面具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
服務(wù)項(xiàng)目:
1.甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。
優(yōu)級(jí)胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
特點(diǎn):適用范圍廣,能夠檢測(cè)特異位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。
2.亞硫酸氫鹽測(cè)序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR,在擴(kuò)增過(guò)程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶,*后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化,稱為BSP-直接測(cè)序法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測(cè)序,可以提高測(cè)序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測(cè)序法。
特點(diǎn):**度高,能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出甲基化的程度百分比。
送樣要求:
細(xì)胞(≥106 個(gè))、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。
服務(wù)價(jià)格:
服務(wù)內(nèi)容
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數(shù)量
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單價(jià)
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交貨期限
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數(shù)量
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亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序法(BSP)
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≤40個(gè)
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800元/樣本/基因(5個(gè)克?。?/span>
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15~20個(gè)工作日
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>40個(gè)
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協(xié)商
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1000元/樣本/基因(10個(gè)克隆)
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20~25個(gè)工作日
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>40個(gè)
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協(xié)商
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甲基化特異性的PCR法(MSP)
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≤50個(gè)
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350元/樣本/基因
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10~20個(gè)工作日
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>50個(gè)
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優(yōu)級(jí)胎牛血清 玉博生物 胎牛血清gibco/hyclone
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